产品目录

LightFlash快速内切酶是一系列经过基因工程重组的快速限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR产物或基因组DNA等的快速酶切。所有LightFlash快速内切酶在通用的CutFlash或CutFlash Color Buffer中都具有优良的活性，能够在5～15分钟内完成酶切。此外，百奥莱博的快速碱性磷酸酶、T4 DNA快速连接酶在CutFlash Buffer中均具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

CutFlash Color Buffer包括红色和黄色示踪染料，可将产物直接用于凝胶电泳。CutFlash Color Buffer的红色染料与2500bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近；黄色染料与10bp双链DNA片段在1%琼脂糖凝胶中迁移速率接近。

5'…T^▼G A T C A…3'
3'…A C T A G_▲T…5'

组分	规格
LightFlash BclI	125μL
10×CutFlash Buffer	1mL
10×CutFlash Color Buffer	1mL

保存：-20℃


1×CutFlash Buffer，37℃温育，可在5～15min内完成反应。


80℃加热20min。

• 功能活性检测：37℃下，在20μL通用CutFlash反应体系中，1μL LightFlash BcII能够在15min内完全消化1μg λDNA (Dam-)。
  
• 超长时间温育检测：37℃下，在20μL通用CutFlash反应体系中，将1μL LightFlash BcII与1μg λDNA (Dam-)共同温育3h，未检测到其
• 他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解。更长时间酶切可能出现星号活性。
  
• 酶切-连接-再酶切检测：37℃下，使用10倍酶量的LightFlash BcII消化DNA底物，回收酶切产物，在22℃下使用T4 DNA Ligase (Fast)可以将超过95%的酶切产物重新连接。将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开95%以上的连接产物。

1.DNA快速酶切流程
a.在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

成分	质粒DNA	PCR产物	基因组DNA
ddH2O	15μL	16μL	30μL
10×CutFlash Buffer	2μL	3μL*	5μL
底物DNA	2μL (up to 1μg)	10μL (~0.2μg)	10μL (5μg)
LightFlash BcII	1μL	1μL	5μL
总体积	20μL	30μL	50μL

注^*：本体系适用于经过纯化的PCR产物酶切。未纯化的PCR产物具备一定的离子强度，10×CutFlash Buffer加入量可适当减少至2μL。但由于DNA聚合酶同时具有外切酶活性，会影响酶切产物，因此如下一步需进行克隆等操作，建议酶切前对PCR产物进行纯化。
b.轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；
c.37℃温育15min（质粒），或15～30min（PCR产物），或30～60min（基因组DNA）；
d.80℃温育20min即可使酶失活，停止反应（可选）；
e.如果使用CutFlash Color Buffer进行酶切反应，得到的产物可以直接进行上样电泳。
2.双酶切或多酶切
a.每种快速内切酶的用量为1μL，并根据需要适当扩大反应体系；
b.所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的1/10；
c.如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。
3.适用于质粒的扩大反应体系
相关搜索：BclI限制性内切酶，BclI内切酶，BclI限制酶，限制性内切酶，BclI，FbaI，Ksp22I，TGATCA，LightFlash BclI Restriction Endonuclease